Corpo Discente - Egressos
Naira Sulany Oliveira de Sousa
| Título | "Avaliação da atividade antifúngica de naftoquinonas isoladas e combinadas com anfotericina B contra cepas do complexo Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii" | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 18/09/2025 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Em sigilo | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | Criptococose; Cryptococcus neoformans; Cryptococcus gattii; naftoquinonas; anfotericina B; sinergismo. | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | A criptococose, causada pelos complexos de espécies Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii, permanece uma micose sistêmica de grande relevância clínica, especialmente entre pacientes imunocomprometidos. Apesar dos avanços na terapia antifúngica, a doença ainda apresenta altas taxas de mortalidade, sobretudo em países de baixa e média renda, devido ao diagnóstico tardio, à limitação terapêutica e à resistência crescente das cepas clínicas. O aumento da resistência aos azóis, a toxicidade associada à anfotericina B e o arsenal antifúngico restrito reforçam a necessidade urgente de novas abordagens terapêuticas. Nesse contexto, a investigação de moléculas bioativas provenientes de produtos naturais e de seus análogos sintéticos tem se mostrado uma estratégia promissora na busca por agentes antifúngicos mais eficazes e seguros. Dentre essas substâncias, as naftoquinonas destacam-se por sua ampla atividade biológica e comprovado potencial antifúngico frente a fungos de importância médica. Esta tese foi estruturada em três partes complementares: uma revisão bibliográfica e dois capítulos experimentais. A revisão apresenta o panorama global da criptococose, as limitações da terapia convencional com anfotericina B, flucitosina e fluconazol e os mecanismos de resistência fúngica, além de discutir estratégias modernas de descoberta de novos agentes antifúngicos, como triagem de produtos naturais, modificação estrutural de compostos, reposicionamento de fármacos e terapias combinadas. No Capítulo 1, foi avaliada a atividade antifúngica de cinco naftoquinonas frente a nove isolados de Cryptococcus spp. e investigado o efeito sinérgico em associação à anfotericina B (AmB). A 2-metoxi-1,4- naftoquinona (2-MNQ) apresentou os melhores resultados, com valores de CIM entre 3,12 e 12,5 µg/mL e sinergismo relevante com a AmB (ICIF = 0,27), reduzindo em 4,17 vezes a dose necessária do polieno. A análise de citotoxicidade em células MRC-5 indicou seletividade favorável. No Capítulo 2, os mecanismos de ação da 2-MNQ foram investigados frente à cepa C. neoformans H99, demonstrando que o composto não interage com o ergosterol nem compromete diretamente a parede celular, mas altera a permeabilidade da membrana, promove extravasamento de conteúdo intracelular e reduz a produção de melanina, mesmo em concentrações subinibitórias. As análises por microscopia eletrônica de varredura revelaram alterações morfológicas progressivas compatíveis com dano celular. Os resultados obtidos reforçam o potencial da 2-MNQ como candidata promissora para desenvolvimento de formulações combinadas e de novas estratégias terapêuticas contra a criptococose. | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | Cryptococcosis, caused by the Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii species complexes, remains a systemic mycosis of major clinical relevance, particularly among patients. Despite advances in antifungal therapy, the disease continues to present high mortality rates, especially in low- and middle-income countries, due to delayed diagnosis, limited treatment options, and the increasing resistance of clinical isolates. The rise of azole resistance, the toxicity associated with amphotericin B, and the restricted antifungal arsenal reinforce the urgent need for new therapeutic approaches. In this context, the investigation of bioactive molecules derived from natural products and their synthetic analogues has emerged as a promising strategy in the search for safer and more effective antifungal agents. Among these substances, naphthoquinones stand out for their broad biological activity and proven antifungal potential against medically important fungi. This thesis was structured in three complementary parts: a literature review and two experimental chapters. The review presents the global scenario of cryptococcosis, the limitations of conventional therapy with amphotericin B, flucytosine, and fluconazole, and the mechanisms of fungal resistance. It also discusses current strategies for the discovery of new antifungal agents, including the screening of natural products, structural modification of bioactive compounds, drug repositioning, and combination therapies. In Chapter 1, the antifungal activity of five naphthoquinones was evaluated against nine isolates of Cryptococcus spp., and the synergistic effect in combination with amphotericin B (AmB) was investigated. Among the tested compounds, 2-methoxy-1,4-naphthoquinone (2-MNQ) showed the best results, with MIC values ranging from 3.12 to 12.5 µg/mL and a significant synergistic interaction with AmB (FICI = 0.27), resulting in a 4.17-fold reduction in the required dose of the polyene. Cytotoxicity analysis in MRC-5 human lung fibroblast cells indicated a favorable selectivity profile. In Chapter 2, the mechanisms of action of 2-MNQ were investigated against the C. neoformans H99 strain, showing that the compound does not interact with ergosterol or directly affect the cell wall integrity but alters membrane permeability, promotes intracellular content leakage, and reduces melanin production even at subinhibitory concentrations. Scanning electron microscopy revealed progressive morphological alterations consistent with cellular damage. The results obtained reinforce the potential of 2-MNQ as a promising candidate for the development of combined formulations and innovative therapeutic strategies against cryptococcosis. | ||||||||||||||||||||||||
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