Corpo Discente - Egressos
Eliane Braga Ribeiro
| Título | DESENVOLVIMENTO DE UM BIOSSENSOR AMPEROMÉTRICO BASEADO NA ENZIMA GLUTATIONA S-TRANSFERASE PARA DETECÇÃO DE AGROTÓXICOS PIRETROIDES EM AMOSTRAS AMBIENTAIS | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 10/12/2021 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Visualizar a Tese(2MB) | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | inibição enzimática; docagem molecular; detecção eletroquímica; destino ambiental; monitoramento ambiental. | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | O uso de pesticidas tem gerado diversos transtornos e problemas ambientais. Considerando a necessidade de monitoramento dessas substâncias químicas na natureza, este trabalho tem como objetivo, o desenvolvimento de um biossensor amperométrico para a detecção de inseticidas piretroides, em amostras ambientais. Nesse sentido, foram realizadas análises in silico sobre o potencial de contaminação de águas superficiais e subterrâneas e de docagem molecular da enzima glutationa S-transferase (GST) com nove compostos piretroides. Foram realizadas também análises in vitro, como a determinação da atividade enzimática por meio de análise espectrofotométrica e ensaios eletroquímicos de inibição da GST, frente aos inseticidas piretroides. Na ocasião foram preparados biossensores serigrafados à base de GST com eletrodo de trabalho modificados com os mediadores azul de Meldola com sal de Reinecke - MBRS e ftalocianina de cobalto - CoPC. Para análise e caracterização eletroquímica destes dispositivos, foram utilizadas as técnicas de voltametria cíclica com faixa de potencial de - 0,8 V a 0,8 V e taxa de varredura de 50 mV s-1 e cronoamperometria com potencial fixo de 200 mV s-1. Os resultados obtidos indicaram médio potencial de transporte dos inseticidas em associação ao sedimento e baixo potencial para o transporte destas substâncias dissolvidas em água, para a maioria dos inseticidas em estudo. Todos os compostos testados na docagem apresentaram energia negativa de ligação com valores em moldock score variando de -75 a -91, indicando afinidade com o sítio catalítico da enzima. Nas análises espectrofotométricas foram encontrados para a constante de inibição - Ki, valores de 0,12 µmol.L-1 a 20 µmol.L-1, para os compostos fenpropatrina e deltametrina, respectivamente. Para os limites de detecção-LDs foram encontrados valores de 0,03 mg.L-1 a 0,36 mg.L-1, para deltametrina e cipermetrina, respectivamente. As análises eletroquímicas, foram realizadas utilizando-se biossensor modificado com MBRS, o qual apresentou melhor desempenho eletroquímico em relação ao mediador CoPC. Com este dispositivo foram registrados valores de LDs de 3,72 µg.L-1 a 83,54 µg.L-1, respectivamente para lambda-cialotrina (faixa linear de 1 a 50 µg.L-1, R2 = 0,99) e cipermetrina (faixa linear de 8 a 200 µg.L-1, R2 = 0,98). Com os resultados obtidos considera-se que o biossensor elaborado se mostrou eficaz para aplicação em análise de amostras de produtos agrícolas e análise de água. Assim como apresentou características relevantes, tais como sensibilidade adequada, baixo custo para o seu desenvolvimento, simplificado processo de construção e manuseio, boa reprodutibilidade e estabilidade ao longo do tempo de análise. Salienta-se que a associação das metodologias in silico e in vitro aqui aplicadas, constituíram uma importante estratégia para a realização desta pesquisa, tendo em vista que o protótipo elaborado pode auxiliar no monitoramento e controle ambiental de agroquímicos piretroides. Ressalta-se também que o presente estudo gerou publicações de dados iniciais em revistas científicas e outros artigos foram submetidos para revistas nacionais e internacionais e aguardam parecer. Uma patente de inovação foi gerada como produto da presente Tese e depositada no Instituto Nacional de Propriedade Industrial – INPI, antes mesmo da data de defesa deste estudo. | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | The use of pesticides has generated several disorders and environmental problems. Considering the need to monitor these chemicals in nature, this work aims to develop an amperometric biosensor for the detection of pyrethroid insecticides in environmental samples. In this sense, in silico analyzes were carried out on the potential for contamination of surface and groundwater and molecular docking of the enzyme glutathione S-transferase (GST) with nine pyrethroid compounds. In vitro analyzes were also performed, such as the determination of enzymatic activity through spectrophotometric analysis and electrochemical GST inhibition assays against pyrethroid insecticides. On that occasion, screen-printed biosensors based on GST were prepared with working electrode modified with the mediators Meldola blue with Reinecke`s salt - MBRS and cobalt phthalocyanine - CoPC. For electrochemical analysis and characterization of these devices, cyclic voltammetry techniques with a potential range of -0.8 V to 0.8 V and a sweep rate of 50 mV s-1 and chronoamperometry with a fixed potential of 200 mV s-1 were used. The results obtained indicated medium potential for transport of insecticides in association with sediment and low potential for transport of these substances dissolved in water, for most of the insecticides under study. All compounds tested during docking showed negative binding energy with moldlock scores ranging from -75 to -91, indicating affinity with the catalytic site of the enzyme. In the spectrophotometric analysis, values from 0.12 µmol.L-1 to 20 µmol.L-1 were found for the inhibition constant - Ki, for the compounds fenpropathrin and deltamethrin, respectively. For the detection limits-LDs, values from 0.03 mg.L-1 to 0.36 mg.L-1 were found for deltamethrin and cypermethrin, respectively. The electrochemical analyzes were performed using a biosensor modified with MBRS, which presented better electrochemical performance in relation to the CoPC mediator. With this device, LD values from 3.72 µg.L-1 to 83.54 µg.L-1 were recorded, respectively for lambda-cyhalothrin (linear range from 1 to 50 µg.L-1, R2 = 0.99) and cypermethrin (linear range from 8 to 200 µg.L-1, R2 = 0.98). With the results obtained, it is considered that the elaborated biosensor proved to be effective for application in the analysis of samples of agricultural products and water analysis. It also presented relevant characteristics, such as adequate sensitivity, low cost for its development, simplified construction and handling process, good reproducibility and stability over time of analysis. It should be noted that the association of in silico and in vitro methodologies applied here constituted an important strategy for carrying out this research, considering that the prototype developed can help in the monitoring and environmental control of pyrethroid agrochemicals. It is also noteworthy that the present study generated publications of initial data in scientific journals and other articles were submitted to national and international journals and are awaiting an opinion. An innovation patent was generated as a product of this Thesis and deposited at the National Institute of Industrial Property – INPI, even before the date of defense of this study | ||||||||||||||||||||||||
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