Corpo Discente - Egressos
Vera Lucia Maciel Silva
| Título | AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTITUMORAL DA FRAÇÃO DICLOROMETÂNICA OBTIDA DAS RAÍZES DE Arrabidaea brachypoda (DC BUREAU) | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 30/08/2022 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Em sigilo | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | câncer; quimioterápico; produtos naturais; microscopia de força atômica. | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | O câncer afeta milhões de pessoas, representando um dos maiores problemas de saúde pública em todo o mundo. Os tratamentos disponíveis têm vários efeitos adversos e pouca especificidade. Assim, a necessidade de opções terapêuticas mais eficazes, com menor toxicidade e maior especificidade, tem intensificado a busca por novos fármacos. Arrabidaea brachypoda é uma planta nativa do Cerrado brasileiro conhecida como “cipó-una”, “santo cipó”, “cervejinha do campo”, popularmente utilizada no tratamento de inflamações em geral, cálculos renais e dores. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial antitumoral da fração diclorometânica (FDCM) obtida de raízes de A. brachypoda, cujos componentes são três flavonóides diméricos de estruturas incomuns, denominados braquidinas. A partir do ensaio sulforrodamina B (SRB) foi constatada citotoxicidade da FDCM, sendo esta atividade influenciada pelo soro fetal bovino (SFB). Análise in sílico demonstrou forte afinidade entre a albumina encontrada no soro e as braquidinas, confirmando o impacto da concentração do SFB na atividade antitumoral da FDCM. Com base nisso, células de câncer de mama (MCF7), colo de útero (HeLa), próstata (DU145), além de células de próstata não tumorais (PNT2), foram mantidas em meio de cultura com SFB 1% e tratadas com diferentes concentrações da FDCM (1 a 8 µg/mL). Os ensaios revelaram valores de IC50 de 2,77, 2,46, 2,51 µg/mL, e 4,08 µg/mL para MCF7, Hela, DU145 e PNT2, respectivamente. Análise de genotoxicidade pelo ensaio cometa revelou que a FDCM não causa danos ao DNA quando as células tumorais e não tumorais são expostas a ½ IC50, IC50 e dobro IC50, por por 3 e 24 horas. Além disso, a FDCM inibiu a formação de colônias (ensaio clonogênico) de células tumorais de modo dependente da concentração (r = -0,944, p <0,05), sendo essa inibição quase total em células HeLa e MCF7 expostas aos seus respectivos IC50. Adicionalmente, tratamentos com 2,5 µg/mL e 1,25 µg/mL inibiram significativamente a formação de colônias DU145 em 87,3 e 39,2%, respectivamente. A migração celular foi avaliada pelo ensaio wound healing, sendo observado redução da mobilidade celular de DU145 (r = -0.751, p < 0.05), enquanto não houve efeito na linhagem não tumoral PNT2. Análise por Microscópia de Força Atômica (MFA) revelou alterações ultraestruturais (buracos) nas superfícies da membrana nuclear de células DU145 tratadas com FDCM. Adicionalmente, observamos uma correlação positiva entre rugosidade da membrana celular e concentração da fração (r= 0,857, p < 0,05), sendo de 7,9 ± 0,43 nm para células não tratadas, 11,6 ± 1,42 nm e 15,37 ± 3,9 para células tumorais expostas a 2,5 µg/mL e 1,25 µg/mL, respectivamente. Todos esses achados suportam a atividade antitumoral da FDCM e sugerem que a indução de alterações ultraestruturais na membrana celular pode ser um dos mecanismos de ação das braquidinas. | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | Cancer affects millions of people, representing one of the biggest public health problems worldwide. Available treatments have several adverse effects and little specificity. Thus, the need for more effective therapeutic options, with less toxicity and greater specificity, has intensified the search for new drugs. Arrabidaea brachypoda is a native plant of the Brazilian Cerrado known as "cipó-una", "santo cipó", "cervejinha do campo", popularly used in the treatment of inflammation, kidney stones and pain. Our main aim was to evaluate the antitumor potential of the dichloromethane fraction (DCMF) obtained from A. brachypoda roots, whose components are three dimeric flavonoids of unusual structures, called brachydins. Sulforhodamine B assay results revealed DCMF cytotoxicity, and the impact of fetal bovine serum (FBS) on this activity. In silico analysis showed strong affinity between serum albumin and brachydins, confirming the impact of FBS concentration on the antitumor activity of DCMF. Based on this, cancer cells from breast (MCF7), cervix (HeLa), prostate (DU145), as well as non-tumor prostate cells (PNT2), were maintained in culture medium with 1% FBS and treated with different DCMF concentrations (1 to 8 µg/mL). Assays revealed IC50`s of 2.77, 2.46, 2.51 µg/mL and 4.08 µg/mL for MCF7, Hela, DU145 and PNT2, respectively. Genotoxicity analysis by the comet assay revealed that DCMF does not cause DNA damage when both tumor and non -tumor cells are exposed to ½ IC50, IC50 and double IC50 for 3 and 24 hours. In addition, DCMF inhibited colony formation (by clonogenic assay) of tumor cells in a concentration-dependent manner (r = -0.944, p <0.05), with almost total inhibition in HeLa and MCF7 cells exposed to their respective IC50. Additionally, treatments with 2.5 µg/mL and 1.25 µg/mL significantly inhibited DU145 colony formation by 87.3 and 39.2%, respectively. Cell migration was evaluated by the wound healing assay, which revealed reduced mobility of DU145 cells (r = -0.751, p < 0.05), whereas there was no effect on the PNT2 cell line. Atomic Force Microscopy (AFM) analysis revealed ultrastructural changes (holes) on the nuclear membrane surfaces of DCMF-treated DU145 cells. Additionally, there was a positive correlation between cell membrane roughness and fraction concentration (r= 0.857, p < 0.05), with 7.9 ± 0.43 nm for untreated cells, and 11.6 ± 1.42 nm and 15.37 ± 3.9 for tumor cells exposed to 2.5 µg/mL and 1.25 µg/mL, respectively. All these findings support the antitumor activity of DCMF and suggest that the induction of ultrastructural changes in the cell membrane may be one of the mechanisms of action of brachydins. | ||||||||||||||||||||||||
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