Corpo Discente - Egressos
Alana Batista Fernandes
| Título | Expressão heteróloga das proteínas C e E2 do vírus Chikungunya utilizando células de bactecrias e leveduras | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 30/09/2022 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Visualizar a Tese(1.01MB) | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | CHIKV; expressão; Chikungunya; proteínas. | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | O vírus chikungunya (CHIKV) é um arbovírus do grupo dos alfavírus, da família Togaviridaee transmitido por mosquitos para os seres humanos sendo capaz de causar doenças graves, e surtos epidêmicos em regiões como África, Ásia, Europa e América do Norte e do Sul. Apeasr dessa prevalência global, até o momento não existem vacinas licenciadas para prevenção da infecção do CHIKV. As proteínas heterologas do capsídeo C e E2 do envelope viral, são fortes canditadas a produção de uma possível vacina contra o CHIKV. O objetivo geral desta pesquisa é: Expressar as proteínas heterologas C (capsídeo) e E2 do vírus CHIKV utilizando o sistema de bactéria E.coli e P. pastoris com intuito de obter quantidades expressivas destas proteínas para produzir futuros antígenos específicos na ativação da resposta imune. A metodologia adotada foi: As proteínas recombinantes foram digeridas com enzimas de digestão espcificas para confirmação da entrada do inserto nas células hospedeiras, em seguida foram transformadas, expressadas e por fim purificadas a partir de corpos de inclusão usando cromatografia Ni-NTA. A análise dos resultados demonstrou que o protocolos de procedimentos laboratoriais desenvolvido por nossa equipe conseguiu obter a expressão e purificação de forma eficiente, sem alteração no peso molecular das proteínas. Esses dados podem contribuir para o desenvolvimento de novos testes para disgnosticar o vírus ou ainda novas estratégias de vacinas anti-CHIKV baseadas em antígenos recombinantes a partir de desenhos de genes sintéticos. | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | The chikungunya virus (CHIKV) is an arbovirus of the alphavirus group, of the Togaviridae family, transmitted by mosquitoes to humans and capable of causing serious diseases and epidemic outbreaks in regions such as Africa, Asia, Europe and North and South America. The heterologous proteins of the C and E2 capsid of the viral envelope are strong candidates for the production of a possible vaccine against CHIKV. The general objective of this research is: Express the heterologous proteins C (capsid) and E2 of the CHIKV virus using the bacterial system E.coli and P. pastoris in order to obtain expressive amounts of these proteins to produce future specific antigens in the activation of the immune response. The methodology adopted was: The recombinant proteins were digested with specific digestion enzymes to confirm the insertion of the insert into the host cells, then they were transformed, expressed and finally purified from inclusion bodies using Ni-NTA chromatography. The analysis of the results showed that the protocol of laboratory procedures developed by our team was able to obtain expression and purification efficiently, without changing the molecular weight of the proteins.These data may contribute to the development of new tests to diagnose the virus or even new strategies for anti-CHIKV vaccines based on recombinant antigens from synthetic gene designs. | ||||||||||||||||||||||||
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