Corpo Discente - Egressos
Alessandra Alves da Silva Magalhães
| Título | ESTUDO DO POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO DE Lentinus crinitus (L.) Fr., UM BASIDIOMICETO DA AMAZÔNIA | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 23/03/2020 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Em sigilo | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | Lentinus crinitus, Fermentação submersa, Protease, Nanopartículas de prata, atividade antioxidante. | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | A Amazônia é uma região de grande biodiversidade, seu clima tropical com altas temperaturas justifica essa pluralidade ecológica que abriga uma enorme quantidade de espécies. Dentre estas, os basidiomicetos, fungos comumente utilizados na medicina popular de povos asiáticos devido ao seu valor terapêutico. Cogumelos são capazes de sintetizar uma variedade de metabólitos secundários que apresentam atividade tais como: antitumoral, antioxidante, antiinflamatória, hipoglicêmica e antibiótica. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o cogumelo a nível molecular, investigar o crescimento in vitro de Lentinus crinitus (L.) Fr., sua composição centesimal, produção de enzimas hidrolíticas e biomoléculas antioxidantes de interesse para a indústria, assim como avaliar o seu potencial como biocatalisador de nanopartículas de prata. A caracterização molecular de L. crinitus foi realizada por métodos moleculares utilizando sequencias de DNA ribossomal. Foi realizada a determinação das melhores condições de produção de biomassa por fermentação submersa através da análise da influencia dos parâmetros físico-químicos. O potencial enzimático, atividade antimicrobiana, antioxidante e composição nutricional foram investigados por meios de ensaios in vitro. Além disso, foram avaliados os possíveis efeitos citotóxicos do extrato fúngico. Foi realizada a caracterização molecular do cogumelo Lentinus crinitus (L.) Fr. em nível de espécie por meio da análise de quatro regiões variáveis: ITS1, ITS2 e D1/D2 do gene 28S rRNA. Verificou-se que a temperatura de 35 °C foi a mais favorável para o crescimento micelial, assim como, a faixa de pH entre 5,0 e 5,5 se mostrou mais adequada para o cultivo deste fungo. A composição centesimal da biomassa micelial revelou teor de proteínas 3,78%, carboidratos 8,10%, fibras 10,94% e lipídios 0,26%. A maior atividade das proteases de L. crinitus foi determinada no meio contendo glicose e gelatina. A atividade ótima dessas enzimas foi determinada em pH 5,0, a 50°C, e a estabilidade, em pH 5,0, à temperatura de 60°C. As proteases foram classificadas como metalo, serino e cisteíno proteases. O extrato aquoso de L. crinitus não apresentou ação tóxica contra fibroblastos humanos (MRC5) nas condições analisadas. O extrato etanólico do cogumelo (7,5 mg/mL) apresentou atividade antioxidante quando submetido a análise de capacidade sequestrante dos radicais livres DPPH (434,8 µmoL /g), ABTS (158,6 µmol /g), Fenóis Totais (FT) (33,9 mg EAG/g) e poder redutor de ferro (FRAP) (626,4 µM/g Fe (II)). As correlações de Pearson entre os ensaios foram boas: DPPH e ABTS foram de 0,891, FT 0,976 e FRAP 0,945; ABTS com FT 0,771 e FRAP 0,693; FT e FRAP 0,993 (p <0.05). Espera-se com a continuidade deste trabalho poder contribuir para o conhecimento das potencialidades de um basidiomiceto da Amazônia e depertar o interesse no uso dos cogumelos e/ou de seus extratos para o desenvolvimento de bioprodutos nutracêuticos ou fármacos. | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | The Amazon rainforest is a region with great biodiversity, where tropical climate and high heats explain it’s ecological pluralism shelters a huge amount of species. Between these, the basidiomycetes, a fungi commonly used in Asian alternative medicine due to it`s therapeutic value. Mushrooms are capable of synthesizing a variety of secondary metabolites, such activity consists of: anti-tumoric, antioxidant, anti-inflammatory, hypoglycemic and antibiotic. The purpose of this work is to characterize the mushroom at a molecular level, investigate the growth in vitro of Lentinus crinitus (L.) Fr., its centesimal composition, hydrolytic enzymes and antioxidant biomolecules that is interesting for industrial production, as well as to evaluate its potential as silver nanoparticles biocatalyst. The molecular characterization of L. crinitus was made by molecular methods using ribosomal DNA sequences. The best conditions of biomass production by submerged fermentation were determined through analysis of the physical-chemical parameters influence. The enzymatic potential, antimicrobial activity, antioxidant and nutritional composition were investigate by in vitro assays. Furthermore, possible cytotoxic effects of the fungi extratus were rated. A molecular characterization of the mushroom Lentinus crinitus (L.) Fr. was carried out in species level by the analysis of four variable regions: ITS1, ITS2 e D1/D2 of the gene 28S rRNA. Therefore, it was verified that 35 °C was the most propitious temperature to the mycelial growth, so as, the pH range between 5.0 and 5.5 proved to be more adequate to cultivation of that fungi. The mycelial biomass’ centesimal composition revealed 3,78% protein content, 8,10% carbohydrates, 10,94% fibers and lipids 0,26%. Increased protease L. crinitus activity was rated in medium containing glucose and gelatin. The enzymes’ optimal activity was rated in 5.0 pH, at 50°C, and stability, in pH 5.0, at temperature 60°C. The proteases were proteases foram classificadas como metalo, serine e cysteine proteases. The aqueous extract of L. crinitus did not show any toxic action against human fibroblasts (MRC5) in the analyzed conditions. The ethanolic extract of the mushroom (7.5 mg / mL) showed antioxidant activity when subjected to the analysis of the scavenging capacity of DPPH free radicals (434.8 µmL / g), ABTS (158.6 µmol / g), Total Phenols (FT ) (33.9 mg EAG / g) and iron reducing power (FRAP) (626.4 µM / g Fe (II)). Pearson`s correlations between the tests were good: DPPH and ABTS were 0.891, FT 0.976 and FRAP 0.945; ABTS with FT 0.771 and FRAP 0.693; FT and FRAP 0.993 (p <0.05). It is hoped with the continuity of this work to be able to contribute to the knowledge of the potential of a basidiomycete from the Amazon and to arouse interest in the use of mushrooms and/or their extracts for the development of nutraceutical or pharmaceutical bioproducts. | ||||||||||||||||||||||||
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