Corpo Discente - Egressos
Sakae Yotsumoto Neto
| Título | DESENVOLVIMENTO DE IMUNOSSENSORES FOTOELETROQUÍMICOS PARA DETECÇÃO DE Leishmania (L.) infantum | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 29/03/2019 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Em sigilo | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | Imunossensores fotoeletroquímico, Sulfeto de cádmio (CdS), Oxido de Zinco (ZnO), Leishmaniose visceral canina. | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | O presente trabalho descreve o desenvolvimento de imunossensores fotoeletroquímicos para a detecção de anticorpos de anti-Leishmania infantum. A primeira plataforma é fundamentada em filmes de sulfeto de cádmio eletrodepositados sobre filmes de óxido de zinco previamente eletrodepositados sobre eletrodo de vidro recoberto com óxido de estanho e índio (ITO). O efeito da luz e a cinética de regeneração do agente de sensibilização CdS foram investigadas por microscopia eletroquímica de varredura no modo feedback. A plataforma foi modificada com dois diferentes peptídeos (PEP 13 e PEP 16) provenientes de duas diferentes proteínas de alta especificidade e seletividade no reconhecimento de anticorpos de L. infantum, o qual foi posteriormente designado como Peps/CdS/ZnO/ITO. O primeiro imunossensor proposto apresentou-se como uma proposta promissora para discriminar amostras de soro canino positivos e negativos. O segundo imunossensor é baseado em antígenos recombinantes de L. infantum imobilizados sobre filmes de sulfeto de cádmio sensibilizados com nanopartículas de ouro previamente depositados sobre ITO (AuNP/CdS/ITO). O bandgap e o potencial de banda plana da plataforma foram estimados por espectroscopia molecular no UV-vis e espectroscopia de impedância eletroquímica. Os efeitos da natureza, pH e concentração das soluções tampão bem como o efeito do potencial elétrico aplicado sobre a resposta fotoeletroquímica foram também investigados. Em condições otimizadas, a plataforma modificada com os antígenos recombinantes de L. infantum (C8/MPA-AuNP/CdS/ITO) apresentou respostas lineares para concentrações dos anticorpos de anti-L. infantum compreendidas entre 1 e 300 nmol L-1. Finalmente, o sensor fotoeletroquímico apresentou excelente capacidade de discriminação de amostras reais de soro canino positivos e negativos. Filmes de CdS depositados por banho químico sobre FTO (CdS/FTO) foram aplicados a amostras de soro canino positivos e negativos com o propósito de avaliar a potencialidade dos sistemas fotoeletroquímicos como ferramentas auxiliares em ensaios clínicos. A plataforma CdS/FTO modificada com antígenos recombinantes de L. infantum (C8) apresentou 96 % de seletividade clínica e 88 % especificidade clínica. | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | This work describes the development of photoelectrochemical immunosensors for the detection of anti-Leishmania infantum antibodies. The first one is based on electrodeposited zinc oxide and cadmium sulphide films on indium tin oxide coated glass slide (CdS/ZnO/ITO). The effects of the light/dark and regeneration kinetics of CdS sensitizer was evaluated by scanning electrochemical microscopy in feedback mode. The platform was modified by using two different peptides (PEP 13 and PEP 16) from two different proteins of high specificity and selectivity in recognition of L. infantum antibodies, which was henceforward denoted as Peps/CdS/ZnO/ITO. The proposed photoelectrochemical immunosensor is a cheap and promising alternative to discriminate positive and negative canine serum samples. The second one describes the development of a high sensitive photoelectrochemical immunosensor for the detection of anti-Leishmania infantum antibodies. The proposed sensor is based on recombinant L. infantum antigens and cadmium sulphide films sensitized with gold nanoparticles deposited on indium tin oxide coated glass slide (AuNP/CdS/ITO). The bandgap and flatband characteristics of AuNP/CdS platform were evaluated by UV-Vis spectrophotometry and electrochemical impedance spectroscopy. The effects of the nature, concentration and pH of the buffer solution as well as the effects of the applied potential on the response of photoelectrochemical platform to a donor molecule were also investigated. Under optimized conditions, the AuNP/CdS/ITO platform modified with recombinant L. infantum antigens (C8/MPA-AuNP/CdS/ITO) shows a linear response range from 1 up to 300 nmol L-1 to anti-C8 antibodies. Finally, the capability of the proposed photoelectrochemical immunosensor to discriminate positive and negative canine serum samples was evaluated in real canine serum samples. CdS films obtained by chemical bath deposition were applied to positive and negative canine samples aiming the evaluation of photoelectrochemical devices as auxiliary systems for clinical assays. The L. infantum (C8) recombinant antigens modified CdS photoelectrochemical platform presented clinical selectivity and sensitivity of 96% and 88%, respectivelly. | ||||||||||||||||||||||||
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