Corpo Discente - Egressos
Eloana Benassi Ribeiro de Souza
| Título | ESTUDO QUÍMICO E ATIVIDADE IMUNOMODULADORA DE EXTRATOS OBTIDOS DA SECREÇÃO DA GLÂNDULA PAROTOIDE DE Rhaebo guttatus DA AMAZÔNIA BRASILEIRA | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 24/03/2020 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Em sigilo | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | Amazônia brasileira; Rhaebo guttatus; Perfil químico; Ação imunomoduladora | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | A pele dos anfíbios é um dos órgãos responsáveis pela produção de metabólitos secundários com amplo espectro de atividades farmacológicas sendo as aminas, alcaloides, peptídeos, proteínas e esteroides as principais classes encontradas na secreção cutânea desses animais. Essa diversidade de compostos bioativos tornam os anuros fontes promissoras de biomoléculas que podem contribuir de maneira significativa com o desenvolvimento de novos fármacos. Dessa forma, o presente estudo caracterizou a composição química da secreção da glândula parotoide de Rhaebo guttatus (R. guttatus) de diferentes regiões da Amazônia brasileira. Para isso, a secreção de interesse foi submetida à extração metanólica e os extratos obtidos foram analisados por CLAE-MS/MS com o objetivo de adquirir um perfil químico qualitativo da secreção parotoide dos anuros capturados. Assim foi possível observar que a composição química dos extratos metanólicos obtidos a partir da secreção parotoide de anuros do sul da Amazônia brasileira se difere dos extratos obtidos da região de transição AmazôniaCerrado. Também foi realizado o estudo sobre a influência do solvente no processo de extração de metabólitos secundários da secreção parotoide de R. guttatus seguindo um planejamento de mistura com quatro solventes, sendo eles: etanol, acetato de etila, diclorometano e hexano. Nesta etapa da pesquisa verificou-se que o perfil químico do extrato metanólico se difere dos demais extratos, além do mais a porcentagem relativa dos compostos extraídos mostrou-se ser dependente do solvente extrator o que pode auxiliar os trabalhos futuros na escolha do solvente de acordo com os objetivos almejados de cada estudo. Por fim, o extrato metanólico também foi avaliado quanto à ação imunomoduladora sobre os macrófagos peritoneais de camundongos na produção espontânea de peróxido de hidrogênio e óxido nítrico. Nesta etapa, camundongos Swiss foram tratados diariamente durante 7 ou 30 dias com soluções de extrato metanólico com concentrações de 8 μg/mL, 16 μg/mL e 32 μg/mL. O volume de extrato metanólico utilizado foi de 100 μL/animal/dia. Com esse experimento averiguou-se que os animais tratados por sete dias não apresentaram alterações nos parâmetros propostos independetemente da concentração da solução metanólica utilizada. Já os camundongos tratados com a solução de 16 μg/mL de v extrato metanólico de R. guttatus por 30 dias apresentaram menores concentrações de H2O2 (0,44 nM ±0,10) em relação aos roedores tratados com o veículo (0,69 nM ±0,09). O mesmo foi observado para a produção de NO· que se diferenciou significativamente para os camundongos tratados com a a solução de 16 μg/mL (71,06 µM ±7,38) em relação ao grupo veículo (84,09 µM ±3,28). As soluções de 8 μg/mL e 32 μg/mL de extrato metanólico não provocaram alterações nos parâmetros propostos para o tratamento de 30 dias. Dessa forma, conclui-se que o extrato metanólico da secreção parotoide de R. guttatus apresentou ação imunomoduladora sobre os macrófagos peritoneais de camundongos Swiss. Com isso o presente trabalho poderá contribuir com o conhecimento da anurofauna da Amazônia brasileira.A pele dos anfíbios é um dos órgãos responsáveis pela produção de metabólitos secundários com amplo espectro de atividades farmacológicas sendo as aminas, alcaloides, peptídeos, proteínas e esteroides as principais classes encontradas na secreção cutânea desses animais. Essa diversidade de compostos bioativos tornam os anuros fontes promissoras de biomoléculas que podem contribuir de maneira significativa com o desenvolvimento de novos fármacos. Dessa forma, o presente estudo caracterizou a composição química da secreção da glândula parotoide de Rhaebo guttatus (R. guttatus) de diferentes regiões da Amazônia brasileira. Para isso, a secreção de interesse foi submetida à extração metanólica e os extratos obtidos foram analisados por CLAE-MS/MS com o objetivo de adquirir um perfil químico qualitativo da secreção parotoide dos anuros capturados. Assim foi possível observar que a composição química dos extratos metanólicos obtidos a partir da secreção parotoide de anuros do sul da Amazônia brasileira se difere dos extratos obtidos da região de transição AmazôniaCerrado. Também foi realizado o estudo sobre a influência do solvente no processo de extração de metabólitos secundários da secreção parotoide de R. guttatus seguindo um planejamento de mistura com quatro solventes, sendo eles: etanol, acetato de etila, diclorometano e hexano. Nesta etapa da pesquisa verificou-se que o perfil químico do extrato metanólico se difere dos demais extratos, além do mais a porcentagem relativa dos compostos extraídos mostrou-se ser dependente do solvente extrator o que pode auxiliar os trabalhos futuros na escolha do solvente de acordo com os objetivos almejados de cada estudo. Por fim, o extrato metanólico também foi avaliado quanto à ação imunomoduladora sobre os macrófagos peritoneais de camundongos na produção espontânea de peróxido de hidrogênio e óxido nítrico. Nesta etapa, camundongos Swiss foram tratados diariamente durante 7 ou 30 dias com soluções de extrato metanólico com concentrações de 8 μg/mL, 16 μg/mL e 32 μg/mL. O volume de extrato metanólico utilizado foi de 100 μL/animal/dia. Com esse experimento averiguou-se que os animais tratados por sete dias não apresentaram alterações nos parâmetros propostos independetemente da concentração da solução metanólica utilizada. Já os camundongos tratados com a solução de 16 μg/mL de v extrato metanólico de R. guttatus por 30 dias apresentaram menores concentrações de H2O2 (0,44 nM ±0,10) em relação aos roedores tratados com o veículo (0,69 nM ±0,09). O mesmo foi observado para a produção de NO· que se diferenciou significativamente para os camundongos tratados com a a solução de 16 μg/mL (71,06 µM ±7,38) em relação ao grupo veículo (84,09 µM ±3,28). As soluções de 8 μg/mL e 32 μg/mL de extrato metanólico não provocaram alterações nos parâmetros propostos para o tratamento de 30 dias. Dessa forma, conclui-se que o extrato metanólico da secreção parotoide de R. guttatus apresentou ação imunomoduladora sobre os macrófagos peritoneais de camundongos Swiss. Com isso o presente trabalho poderá contribuir com o conhecimento da anurofauna da Amazônia brasileira. | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | The skin of amphibians is one of the organs responsible for the production of secondary metabolites with a wide spectrum of pharmacological activities, with amines, alkaloids, peptides, proteins and steroids being the main classes found in the cutaneous secretion of these animals. This diversity of bioactive compounds makes anurans a promising source of biomolecules that can significantly contribute to the development of new drugs. Thus, the present study characterized the chemical composition of the secretion of the parotoid gland of Rhaebo guttatus (R. guttatus) from different regions of the Brazilian Amazon. For this, the secretion of interest was subjected to methanolic extraction and the extracts obtained were analyzed by HPLC-MS / MS in order to acquire a qualitative chemical profile of the parotoid secretion of the captured frogs. Thus it was possible to observe that the chemical composition of the methanolic extracts obtained from the parotoid secretion of anurans from the south of the Brazilian Amazon differs from the extracts obtained from the transition region AmazonCerrado. A study was also carried out on the influence of the solvent on the extraction process of secondary metabolites from the parotoid secretion of R. guttatus following a mixing plan with four solvents, namely: ethanol, ethyl acetate, dichloromethane and hexane. At this stage of the research it was found that the chemical profile of the methanolic extract differs from the other extracts, in addition the relative percentage of the extracted compounds proved to be dependent on the extractor solvent which can assist future work in choosing the solvent accordingly with the objectives of each study. Finally, the methanolic extract was also evaluated for immunomodulatory action on mouse peritoneal macrophages in the spontaneous production of hydrogen peroxide and nitric oxide. In this step, Swiss mice were treated daily for 7 or 30 days with solutions of methanolic extract in concentrations of 8 μg/mL, 16 μg/mL and 32 μg/mL. The volume of methanolic extract used was 100 μL/animal/day. With this experiment it was found that the animals treated for seven days did not show changes in the proposed parameters regardless of the concentration of the methanolic solution used. The mice treated with the solution of 16 μg/mL of methanolic extract of R. guttatus for 30 days showed lower concentrations of H2O2 (0.44 nM ± 0.10) in relation to the rodents treated with the vehicle (0.69 nM ± 0.09). The same was observed for NO· production, which differed significantly for mice treated with 16 μg/ mL (71.06 µM ± 7.38) solution in relation to the vehicle group (84.09 µM ± 3.28 ). The solutions of 8 μg/mL and 32 μg/mL of methanolic extract did not cause changes in the parameters proposed for the 30 day treatment. Thus, it is concluded that the methanolic extract of the parotoid secretion of R. guttatus showed immunomodulatory action on the peritoneal macrophages of Swiss mice. With this the present work will be able to contribute with the knowledge of the anurofauna of the Brazilian Amazon. | ||||||||||||||||||||||||
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