Corpo Discente - Egressos
Larissa Sarmento dos Santos
| Título | CARACTERIZAÇÃO E EXPRESSÃO DE GENES DO COMPLEXO DE HISTOCOMPATIBILIDADE PRINCIPAL DE CLASSE I NÃO CLÁSSICO EM BUBALINOS | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 08/02/2018 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Em sigilo | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | MHC-Ib, Bubalus bubalis, placenta. | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | Os genes do Complexo de Histocompatibilidade Principal (MHC) de classe I não clássicos são monomórficos ou oligomórficos e possuem expressão celular restrita. Além disso, os produtos destes parecem ter diversas funções, dentre elas, atuar como ligantes para receptores inibitórios do complexo natural killer durante a gestação, protegendo o feto da rejeição materna. Em bubalinos, o MHC ainda é pouco estudado e concentra-se principalmente na localização e caracterização molecular de genes de MHC-II. Acredita-se que devido à baixa diversidade genética entre bovinos e bubalinos, os genes de MHC-I não clássico sejam homólogos, contudo podem apresentar variação na expressão durante a prenhez, influenciando na manutenção da gestação e nos mecanismos de defesa da placenta nesta espécie. Dessa forma, este trabalho teve como objetivos caracterizar os genes de MHC-I não clássico em bubalinos, além de verificar a expressão desses genes na placenta bubalina ao longo da gestação, e após estímulo com LPS. O sequenciamento foi realizado das amostras de DNA extraídas do sangue de 15 bubalinos oriundos do matadouro de São Luís e de uma propriedade na Ilha de Marajó – PA. Na análise das sequências geradas, os índices de diversidade genética calculados para os marcadores MIC e NC3 revelaram que os genes na população estudada apresenta uma baixa variabilidade genética. O RNA extraído do placentônio e região intercotiledonária de búfalas no primeiro (n=6), segundo (n=6) e terceiro (n=6) trimestres de gestação foi submetido ao RT-PCR em tempo real utilizando os iniciadores para os genes NC3 e MICB. Os resultados demonstram que a expressão de MICB diferiu significativamente entre diferentes regiões da placenta bubalina no primeiro terço de gestação, com níveis mais elevados de expressão na região intercotiledonária, quando comparado ao placentônio (p<0,05). Também foi observado que tal gene foi mais expresso no primeiro trimestre de gestação (p<0,005), com diminuição gradativa na expressão no segundo e terceiro terços. O gene NC3 foi pouco expresso em ambos os tecidos. As células trofoblásticas de membrana corioalantóidea estimuladas com LPS, durante 6 horas, não apresentaram alteração na transcrição de MHC-I não clássico. Assim, este estudo demonstrou homologia entre os genes MICB e NC3 de bubalinos e bovinos. Em conclusão, os genes de MHC de classe I não clássico (MICB e NC3) são expressos em diferentes tecidos e em diferentes períodos de gestação na placenta bubalina. | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | Non-classical class I Major Histocompatibility Complex (MHC) genes are monomorphic or oligomorphic and have restricted cell expression. In addition, the products of these seem to have several functions, among them, to act as ligands for inhibitory receptors of the natural killer complex during pregnancy, protecting the fetus from maternal rejection. In buffaloes, MHC has not been studied enough and focuses primarily on localization and molecular characterization of MHC-II genes. It is believed that due to low genetic diversity between bovines and buffaloes, the non-classical MHC-I genes are homologous, however they may vary in expression during pregnancy, influencing the maintenance of pregnancy and placental defense mechanisms in this species. Thus, the objective of this work was to perform the molecular characterization of non-classical MHC-I genes in buffaloes, besides to verify the expression of these genes in the buffalo placenta throughout pregnancy, and after stimulation with LPS. Sequencing was performed from DNA samples extracted from the blood of 15 buffaloes from the São Luís slaughterhouse and from a property on the Island of Marajó - PA. In the analysis of the generated sequences, the genetic diversity indexes calculated for the MIC and NC3 markers revealed that the genes in the study population present a low genetic variability. The RNA extracted from the placentônio and intercotyledonary region of buffaloes in the first (n = 6), second (n = 6) and third (n = 6) trimester of gestation was submitted to RT PCR in real time using the primers for the genes NC3 and MICB. The results demonstrate that MICB expression differed significantly between different regions of the buffalo placenta in the first third of gestation, with higher levels of expression in the intercotyledonary region when compared to placentônio (p <0.05). In addition, such a gene was more expressed in the first trimester of gestation (p <0.005), with decrease in expression in the second and third thirds. The NC3 gene had low expression in both tissues. LPS stimulated chorioallantoic membrane trophoblastic cells for 6 hours showed no change in non-classical MHC-I transcription. Thus, this study demonstrated homology between the MICB and NC3 genes of buffaloes and cattle. In addition, non-classical MHC class I genes (MICB and NC3) are expressed in different tissues and at different gestation periods in the buffalo placenta. | ||||||||||||||||||||||||
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