Corpo Discente - Egressos
Joaquim Corsino da Silva Lima
| Título | Estudo da atividade e do mecanismo de ação anti-inflamatório do extrato hidroetanólico das folhas de Fridericia chica (Bonpl.) L.G.Lohmann e de seu isolado 4’,6,7-triidroxi-5-metoxiflavona JOAQUIM | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 31/08/2018 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Em sigilo | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | Fridericia chica, anti-inflamatório, citotoxicidade, 4’,6,7-triidroxi-5-metoxiflavona | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | A inflamação é uma resposta do organismo à injúria tecidual ou infecção, caracterizada na fase aguda pelo aumento da permeabilidade vascular e extravasamento plasmático, resultando em acúmulo de fluido, leucócitos e mediadores para a área inflamada. Fridericia chica (Bonpl.) L.G. Lohmann (Bignoniaceae) é uma trepadeira nativa da Floresta Amazônica, popularmente conhecida como crajirú e cujo decocto das folhas é utilizado para tratamento de doenças como inflamações, úlceras gástricas, infecções, anemia, entre outras. O presente estudo avalia a atividade e o mecanismo de ação anti-inflamatória do extrato hidroetanólico de Fridericia chica (EHFc) e de seu isolado 4’,6,7-triidroxi-5-metoxiflavona (TMF), em modelos experimentais in vivo e in vitro. O EHFc foi obtido por maceração do pó das folhas secas em etanol:água 70% (1:10 p/v). O isolamento da TMF do EHFc foi realizado por técnicas cromatográficas e sua identificação por RMN, 1H e 13C. A toxicidade do EHFc foi avaliada em células CHO-K1 e RAW 264.7 pelo método de Alamar Blue. A atividade e mecanismo de ação anti-inflamatória foi avaliada em camundongos submetidos à peritonite por lipopolissacaridio (LPS 250 ng ip.) e pré-tratados com veículo (água destilada), EHFc (20 mg/kg), TMF (4 e 20 mg/kg) e dexametasona (0,5 mg/kg), sendo quantificados no lavado peritoneal (LP) os leucócitos totais (LT) e o número de neutrófilos (Nt), eosinófilos (Eo) e células mononucleares (Cm), a concentração de óxido nítrico (NO) pelo reagente de Griess e de citocinas pró (IL1- β e TNF- α) e anti-inflamatória (IL-10) por meio de ELISA. No sobrenadante de RAW 264.7 foram determinadas estas mesmas citocinas e a concentração de espécies reativas de oxigênio (EROs) intracitoplasmático por citometria de fluxo. O rendimento do EHFc foi de 16% e da TMF de 0,087%. O EHFc e TMF mostraram-se não citotóxicas (CI50 > 400 μL) em CHO-k1 e RAW 264.7. O EHFc (20 mg/kg) reduziu a contagem de LT em 44% (p<0,001), assim como o número de Nt (23% p <.0,01) e Cm (70% p< 0,001). A TMF (4 e 20 mg/kg) reduziu a contagem de LT, Nt, Eo e Cm, atingindo seu maior efeito (p< 0,001) com 20 mg/kg (LT 67%; Nt 81%; Eo 77% e Cm 62%). O EHFc e TMF reduziram as citocinas IL1-β (63% p< 0,001 e 88% p< 0,001) e TNF- α (52% p < 0,001 e 37% p< 0,05) e apenas com 20 mg/kg de TMF verificou-se aumento (277% p< 0,01) dos níveis de IL-10. Tanto o EHFc (20 mg/kg) quanto a TMF (4 e 20 mg/kg) reduziram (p < 0,001) a concentração de NO no LP em 26, 36 e 42 %, respectivamente. Em RAW 264.7 estimuladas por LPS (1 μg/mL). O EHFc (20 μg/ mL) reduziu (p < 0,001) as concentrações de IL1- β (68 %) e TNF-α (53%). A TMF (2, 10 e 50 μg/mL) reduziu os níveis de IL1-β e TNF-α, atingindo seu maior efeito com 50 μg/mL (74 % p<0,001 IL1-β e 25% p < 0,01 TNF- α) e ainda reduziu EROs atingindo seu maior efeito com 10 μg/mL (38% p< 0,001. O EHFc e TMF não alteraram os níveis de IL-10 in vitro. Os resultados corroboram com o uso popular das folhas de F. chica para inflamações. O EHFc e TMF mostraram-se não citotóxicos in vitro. A TMF participa da ação anti-inflamatoria do EHFc através da inibição da migração leucocitária e redução da formação de EROs. | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | Inflammation is a response of the organism to tissue injury or infection, characterized in the acute phase by increased vascular permeability and plasma extravasation, resulting in accumulation of fluid, leukocytes and mediators to the inflamed area. Fridericia chica (Bonpl.) L.G. Lohmann (Bignoniaceae) is a creeper native to the Amazon Rainforest, popularly known as crajirú, and whose leaf decoction is used to treat diseases such as inflammation, gastric ulcers, infections, anemia, among others. The present study evaluates the activity and mechanism of anti-inflammatory action of the Fridericia chica hydroethanolic extract (HEFc) and its isolated 4`, 6,7-trihydroxy-5-methoxyflavone (TMF) in experimental models in vivo and in vivo vitro. HEFc was obtained by macerating the dry leaves powder in 70% ethanol: water (1:10 w / v). The isolation of TMF from HEFc was performed by chromatographic techniques and its identification by 1H N MR and 13C NMR. HEFc toxicity was evaluated in CHO-K1 and RAW 264.7 cells by the method of Alamar Blue. Anti-inflammatory activity and mechanisms of action were evaluated in mice submitted to lipopolysaccharide peritonitis (LPS 250 ng ip.) And pretreated with vehicle (distilled water), HEFc (20 mg/kg), TMF (4 and 20 mg/kg) and dexamethasone (0.5 mg/kg), the total leukocytes (LT) and the number of neutrophils (Nt), eosinophils (Eo) and mononuclear cells (Mc) were quantified in the peritoneal lavage of nitric oxide (NO) by Griess`s reagent and pro-cytokines (IL-1 and TNF-α) and anti-inflammatory (IL-10) by ELISA. In the supernatant of RAW 264.7, these same cytokines and the concentration of intracytoplasmic reactive oxygen species (ROS) were determined by flow cytometry. The HEFc yield was 16% and the TMP of 0.087%. HEFc and TMF were non-cytotoxic (IC50 > 400 μL) in CHO-k1 and RAW 264.7. HEFc (20 mg/kg) reduced the LT count by 44% (p < 0.001), as well as the number of Nt (23% p <.0.01) and Mc (70% p < 0.001). TMF (4 and 20 mg/kg) reduced the LT, Nt, Eo and Mc counts, reaching its highest effect (p < 0.001) at 20 mg/kg (LT 67%, Nt 81%, E 77% and Mc 62%). HEFc and TMF reduced the cytokines IL1-β (63% p < 0.001 and 88% p < 0.001) and TNF-α (52% p < 0.001 and 37% p < 0.05) and only with 20 mg /kg of TMF verified (277% p < 0.01) of IL-10 levels. Both the HEFc (20 mg/kg) and the TMF (4 and 20 mg/kg) reduced the concentration of NO in the LP by 26, 36 and 42%, respectively (p < 0.001). In RAW 264.7 stimulated by LPS (1 μg/mL), EHFc (20 μg / mL) reduced (p <0.001) the concentrations of IL-1β (68%) and TNF-α (53%). TMF (2, 10 and 50 μg/mL) reduced levels of IL1-β and TNF-α, reaching their highest effect at 50 μg/mL (74% p < 0.001 IL1-β and 25% p < 0.01 TNF-α) and also reduced ROS reaching their highest effect at 10 ug/mL (38% p <0.001). The HEFc and TMF did not alter the levels of IL-10 in vitro. The results corroborate the popular use of F. chica leaves for inflammation. HEFc and TMF were shown to be non-cytotoxic in vitro. TMF participates in the anti-inflammatory action of HEFc through inhibition of leukocyte migration and reduction of ROS formation | ||||||||||||||||||||||||
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