Corpo Discente - Egressos
Esperanza Lucila Hernández Angulo
| Título | Caracterização químico-física e espectroscópica do óleo da gordura visceral de Arapaima gigas: nanoemulsões, ensaios in vitro. | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 20/11/2017 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Em sigilo | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | Arapaima gigas;óleo de peixe;nanoemulsões | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | O presente trabalho teve como objetivo preparar e caracterizar nanoemulsões contendo o óleo extraído da gordura visceral do Pirarucu (Arapaima gigas) e avaliar o seu desempenho através de ensaios in vitro para comprovar sua estabilidade e toxicidade, visando suas aplicações biotecnológicas na alimentação, indústria farmacêutica e cosmética. Inicialmente a gordura visceral de Arapaima gigas foi coletada de peixes criados em cativeiro nos municípios de Bujari e Rio Branco, seus óleos foram identificados por OFAg-1B (óleo fixo do Arapaima gigas de peixes de Bujari - Acre) e OFAg-2B (óleo fixo de Arapaima gigas de Panorama, Rio Branco - Acre). A caracterização física química dos óleos foi realizada através dos índices de acidez, saponificação, de iodo, de peróxido e de refração, além do teor de umidade e densidade. Foram realizadas analises por espectroscopia infravermelha e RAMAN, Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio (RMN-1H) e Cromatografia Gasosa Acoplada ao Espectrômetro de Massa para a identificação dos grupos funcionais dos óleos. As nanoemulsões foram preparadas misturando o óleo de Arapaima gigas em várias concentrações com água destilada e tensoativos de EHL 15,14, 13, 12 e 11 obtidos a partir do Tween80® e do Span 80®. Para a obtenção da emulsão primária os constituintes foram homogeneizados através de agitação mecânica. As nanoemulsões do tipo O/A foram preparadas por meio de agitação em alta energia (sonicação) com um sonicador de ponta. Foi determinado o Equilíbrio Hidrofílico Lipofílico (EHL) para o óleo de A. gigas e construído o Diagrama Pseudoternário de Fase (DTF) para esse EHL, sendo analisada a região de formação da nanoemulsão O/A. A nanoemulsão com melhores características foi a EHL 12.1.1 (correspondendo o EHL12 ao EHL do óleo da gordura visceral do pirarucu e o 1.1. correspondente a região no diagramas pseudoternário), usando o óleo OFAg-1B, A nanoemulsão EHL12.1.1 foi caracterizada através de sua estabilidade ao longo do tempo. Para a determinação da citotoxicidade do OFAg-1B e a nanoemulsão EHL12.1.1 utilizou-se o método de MTT (brometo de 3-metil-[4-5-dimetiltiazol-2-il]- 2,5 difeniltetrazólioem macrófagos de rato da linha J774. Foram realizados testes antibacterianos utilizando EHL12.1.1 com adição de fármacos sintéticos (ceftriaxona e amoxicilina + clavulanato de potássio). Também realizou-se testes antibacterianos da EHL12.1.1 com adição de um produto natural (extrato de chá verde). A finalidade destes ensaios foi determinar os efeitos sobre as bactérias: Klebsiella pneumoniae (ATCC-4352); Staphylococcus aureus (ATCC25923) e Streptococcus pneumoniae (ATCC-11733) e Escherichia coli (ATCC -25922). | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | The objective of the present work was to prepare and characterize nanoemulsions containing the oil extracted from Pirarucu visceral fat (Arapaima gigas) and to evaluate its performance through in vitro assays to prove its stability and toxicity, aiming its biotechnological applications in food, pharmaceutical industry and cosmetics. Initially the visceral fat of Arapaima gigas was collected from captive-bred fish in the municipalities of Bujari and Rio Branco, their oils were identified by OFAg-1B (Arapaima gigas of Bujari-Acre fish) and OFAg-2B (fixed oil of Arapaima gigas of Panorama, Rio Branco - Acre). The physical chemical characterization of the oils was performed through the acidity, saponification, iodine, peroxide and refraction indices, as well as the moisture and density content. Analyzes were performed by infrared spectroscopy and RAMAN, Hydrogen Nuclear Magnetic Resonance (1H-NMR) and Gas Chromatography Coupled to the Mass Spectrometer to identify the functional groups of the oils. Nanoemulsions were prepared by mixing Arapaima gigas oil in various concentrations with distilled water and EHL 15,14,13,12 and 11 surfactants obtained from Tween80® and Span 80®. To obtain the primary emulsion the constituents were homogenized by mechanical stirring. O/A type nanoemulsions were prepared by high energy (sonication) shaking with a tip sonicator. Hydrophilic Lipophilic Equilibrium (EHL) was determined for A. gigas oil and the Pseudoternario Phase Diagram (FTD) was constructed for this EHL, and the nanoemulsion O/A formation region was analyzed. The best-characterized nanoemulsion was EHL 12.1.1 (corresponding to EHL12 to EHL of pirarucu visceral fat oil and 1.1 corresponding to region in the pseudo world diagrams), using OFAg-1B oil, EHL12.1.1 nanoemulsion was characterized through its stability over time. For the determination of the cytotoxicity of OFAg-1B and nanoemulsion EHL12.1.1 the MTT method (3-methyl- [4-5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5-diphenyltetrazolium bromide was used in line macrophages J774. Antibacterial tests were performed using EHL12.1.1 (with addition of synthetic drugs (ceftriaxone and amoxicillin + potassium clavulanate) and antibacterial tests of EHL12.1.1 with the addition of a natural product (green tea extract). The purpose of these assays was to determine the effects on bacteria: Klebsiella pneumoniae (ATCC-4352), Staphylococcus aureus (ATCC-25923) and Streptococcus pneumoniae (ATCC-11733) and Escherichia coli (ATCC-25922). | ||||||||||||||||||||||||
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