Corpo Discente - Egressos
Kayena Delaix Zaqueo
| Título | Isolamento e caracterização bioquímica de serinoproteases do veneno das serpentes Bothrops pirajai e Bothrops brazili. | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 07/08/2015 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Em sigilo | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | Amazônia Sul Ocidental,;Unidade de Conservação;Herpetofauna,;Inventário;Anurofauna. | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | No mundo, foram descritas 7.726 espécies de anfíbios, sendo a ordem Anura a que possui maior número de espécies identificadas com cerca de 6.784 espécies. O Brasil é o país com a maior riqueza da ordem Anura, apresentando o total de 1.039 espécies. O estado de Rondônia apresenta uma das maiores taxas de desmatamento na Amazônia, possuindo várias lacunas sub-amostradas quanto à sua diversidade. Portanto, o estudo dos anuros do Parque Nacional de Pacaás Novos, localizado em Campo Novo de Rondônia, propõem contribuir com o melhor conhecimento quanto a biodiversidade desta região. Foram amostradas duas áreas do parque, uma de floresta de terra firme e a outra de várzea, em seis expedições realizadas durante os meses de julho de 2014 a agosto de 2016, utilizando os métodos de procura visual limitada por tempo (PVLT), amostragem em sítios reprodutivos (ASR) e armadilha de interceptação e queda (AIQ). Para as amostragens de PVLT e ASR, equipe era formada quatro ou cinco pesquisadores coletando durante duas horas/metodologia/noite, totalizando 322 h/observador em ambos ecossistemas. Foram utilizadas quatro AIQ (10 baldes-100L) sendo duas armadilhas em cada base, totalizando 340 baldes/dia/base. Durante as expedições foram registrados 1.571 espécimes, pertencentes a 62 espécies de anuros de 13 famílias: Aromobatidae (5), Bufonidae (4), Centrolenidae (1), Ceratophryidae (1), Craugastoridae (5), Dendrobatidae (2), Hylidae (23), Leptodactylidae (10), Microhylidae (5), Odontophrynidae (1), Phyllomedusidae (3), Pipidae (1) e Ranidae (1). A família de maior ocorrência no parque foi a Hylidae (37,1%). No entanto, Pristimantis fenestratus da família Craugastoridae foi a espécie mais abundante sendo registrados 222 espécimes (14,13%). As espécies menos abundantes (menos de 1%) foram: Allobates femoralis, Dendropsophus leucophyllatus, D. sarayacuensis, Pristimantis delius, P. diadematus, Teratohyla adenocheira, e Trachycephalus cf. cunauaru. Dentre os novos registros para o estado estão Allobates flaviventris, A. cf. gasconi, Pristimantis delius e P. diadematus. Dendropsophus juliani representa o primeiro registro para o Brasil. Quando comparada a riqueza das duas áreas, pode-se afirmar que a riqueza na área de várzea é maior no PNPN, com 18 espécies que foram apenas encontradas nessa área. A riqueza do PNPN é similar a encontrada em Espigão d’Oeste também localizado em Rondônia. | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | Snake venoms are formed by organic and inorganic compounds and result in a complex product of biological nature which present as main objectives the detention, death and the promotion of initial digestion of its prey. In addition, presents a vast potential for exploration of molecules with pharmaceutical applications. Among organic compounds protease should be highlighted due its ability to cause changes on hemostatic system. Snake venoms serine proteases (SVSPs) are a class of proteases that act on different factors of the coagulation cascade. One SVSPs class is described as thrombin-like (SVTLEs) by mimicking some thrombin activities and displays coagulant ability in vitro through the degradation of fibrinogen chains α and/or β. The objectives were (i) to characterize structurally BpirSP-39 previously isolated from Bothrops pirajai venom and (ii) to isolate and characterize the first serine protease (SP) of B. brazili. Studies of this magnitude are justified because they can provide important information on the involvement of proteins during envenoming, which can contribute to a better understanding of the mechanisms of action of these enzymes. Primary and tertiary structures model of both isolated SPs were elucidated. BpirSP-39 presented 224 amino acids and has high identity when compared to other SVSPs. BbrzSP-32 was obtained from B. brazili venom after two chromatographic steps (affinity and reverse phase) and its primary structure showed 240 amino acid residues. Both SPs characterized are enzymes which may take the SP’s structure of Agkistrodon halys (PDB ID: 4E7N), an enzyme used as a model for molecular modeling. The enzymes are glycoproteins globular and monomeric with two α-helices and two barrels formed by sheet-β. BbrzSP32 showed 36 kDa of relative molecular mass and its absolute mass was confirmed by mass spectrometry as 32,520 Da. It present 79.48% identity when compared to other SVSPs and was able to degrade the α-chain of fibrinogen, in vitro models, and is considered a SVTLE-A. It showed a dose-dependent activity in the process of degradation of fibrin networks demonstrating greater specificity for this activity when compared to its thrombolytic action. BbrzSP-32 demonstrated proteolysis activity on gelatin and chromogenic substrates for serine proteases and thrombin-like enzymes (S2288 and S-2238 respectively), besides having coagulant activity on human plasma. | ||||||||||||||||||||||||
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