Corpo Discente - Egressos
Michelle Russo Bendelak
| Título | Avaliação do perfil toxicológico e imunofarmacológico do látex de Euphorbia trucalli Linneau e sua atividade no processo de hipopigmentação. | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 26/02/2016 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Em sigilo | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | Euphorbia tirucalli Lineu;Imunomodulação;Análise toxicológica;atividade tirosinase;hipopigmentação | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | Euphorbia tirucalli L. é uma espécie do gênero Euphorbia, pertencente à família botânica Euphorbiaceae, a qual se encontra distribuída principalmente em regiões tropicais e temperadas do planeta, como a África e América. Existem vários indícios do potencial farmacológico que a espécie Euphorbia tirucalli L apresenta, porém há também divergências entre os pesquisadores sobre sua toxicidade e eficácia. Dentre os usos desta planta pela população em geral, o tratamento do vitiligo e de doenças relacionadas à hipopigmentação é uma delas, o que justifica a pesquisa de seus componentes farmacológicos e o perigo que seu uso possa representar. Neste sentido este trabalho teve por objetivo avaliar o perfil toxicológico, imunomodulador e atividade sobre a tirosinase do látex de Euphorbia tirucalli L. e sua relação com processo de hipopigmentação. A investigação fitoquímica demonstrou a presença de antocianinas, antocianidinas, flavonas, flavonóis e xantonas, flavonóides, taninos hidrolisáveis, taninos condensados e resinas. Observou-se citotoxidade do látex frente ao crustáceo Artemia salina , sendo esta diretamente proporcional à concentração do mesmo (DL50= 80,59 µl/L). Realizou-se um estudo da toxicidade in vivo com o tratamento repetido (15 dias) com látex diluído em água destilada nas concentrações de 50, 100 e 150 µl/L de Euphorbia tirucalli L. em camundongos swiss fêmeas, que não evidenciou alterações significativas na massa corpórea e temperatura dos animais. A análise hematológica indicou um aumento significante (P˃0,05) no grupo tratado com 150 µL/L com relação ao percentual de granulócitos quando comparados ao controle, mas não em relação às taxas bioquímicas (AST, creatinina e lipase). Na análise histopatológica após o sacrifício no 15º dia foram observadas esteatose hepática multifocal com intensidade de leve a moderada, sendo o quadro leve na concentração de 50 µl/L e moderada nos grupos de 100 e 150 µl/L. Em relação ao baço, nos animais dos grupos tratados com látex com a concentração de 150 l/L observou-se edema, depleção multifocal da polpa branca e discreto infiltrado inflamatório polimorfonuclear. Quando o látex foi adicionado nas concentrações de (50-150 µL/ml) à culturas celulares de PBMC houve um aumento na morte celular de aproximadamente 61% em todas as concentrações quando comparados com células cultivadas com DMEM suplementado (artigo 1). Considerando-se o uso do látex diluído pela população para o tratamento do vitiligo, foi realizado um estudo observacional, transversal com coleta de dados clínico-epidemiológicos e amostras de sangue de uma população amostral de conveniência contendo 10 pacientes com diagnóstico clínico de vitiligo e 10 pacientes controles. Dos 20 indivíduos analisados 60% eram do sexo masculino, a variável idade exibiu uma distribuição normal, sem diferença significativa na média entre os grupos (38,9 ± 11,0 vs. 40,5 ± 11,8, respectivamente). Em relação à idade média de início do vitiligo foi de 20,2 ± 12,3 anos. A maioria dos pacientes reportou lesões presentes nas pernas/pés (90%), braços/mãos (80%) e cabeça (60%), enquanto que menos da metade dos pacientes apresentou lesões nas genitais, axilas e peito/costas. Prurido foi o único sintoma relatado por 30% dos portadores de vitiligo. Quanto à classificação dos tipos de vitiligo foi de generalizado em 50%, localizado em 30% e universal em 20% dos pacientes. Não foram observadas alterações significantes nas subpopulações celulares sanguíneas de pacientes com vitiligo, exceto em relação a subpopulação de células T CD4+, que aumentou de forma significante em 17,7% em relação aos controles. Notou-se também um aumento do percentual relativo de células T CD4+ em relação às T CD8+ em portadores de vitiligo (P=0,0076). Foi verificado um aumento significante de 3,6 vezes (P<0,0001) no percentual T CD8+CD25+ (células ativadas) de pacientes com vitiligo em relação aos controles. Por outro lado notou-se uma redução significativa de 1,46 vezes (P=0,0018) no percentual T CD4+CD25+CD127high (células ativadas) e de 1,36 vezes (P<0,0001) no percentual de células T reguladoras (CD4+CD25+CD127low). Houve também uma redução percentual significativa de células T CD4+CD45RA e T CD8+CD45RA+ que refletiu em aumento do fenótipo T CD4+ CD45RO e TCD8+CD45RO (P<0,001).Verificou-se um aumento médio significante na expressão de HLA-DR em pacientes com vitiligo tanto na subpopulação de monócitos CD14+ como na subpopulação linfócitos B CD19+ (P<0,01 para ambos) (artigo2). Para se avaliar o efeito do látex sobre células do sistema imune e de melanócitos, foram realizados experimentos in vitro onde o látex foi adicionado nas concentrações de (50-150 µL/ml) à culturas celulares de melanoma murino B16F10. Não houve diferença significativa na viabilidade celular nas concentrações de 50 e 100 µl/ml, no entanto observou-se 23,19% de morte celular na concentração de 150 µl/ml. Não houve diferença significativa no conteúdo de melanina de células B16F10 tratadas com látex em nenhuma das concentrações analisadas. Observou-se um aumento significante da atividade da tirosinase de cogumelo, nas diluições de látex nas concentrações de 100 µL/ml e 150 µL/ml sendo estes de 43,97 e 84,76% respectivamente. A utilização do látex pode ser uma opção no tratamento de doenças de hipopigmentação, tais como o vitiligo. Contudo, são necessários estudos adicionais com relação a sua toxicidade, ao mecanismo de ação e imunomodulação assim como isolamento do constituinte responsável pela ativação da tirosinase. | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | Euphorbia tirucalli L. is a species of the genus Euphorbia, which belongs to the botanical family Euphorbiaceae, which is distributed mainly in tropical and temperate regions of the world such as Africa and America. There are several indications of pharmacological potential that the specie Euphorbia tirucalli L have but there is also disagreement among researchers about its toxicity and effectiveness. Among the uses of this plant by the general population, the treatment of vitiligo and related hypopigmentation diseases are among of them, which justifies the search of its pharmacological components and the danger that its use may present. In this sense, the goal of this work was to evaluate the toxicological profile, and immunomodulatory activity over tyrosinase of latex extracted from Euphorbia tirucalliL. and its relationship with hypopigmentation process. Results: Phytochemical research has shown the presence of anthocyanins, anthocyanidins, flavones, flavonols and xanthones, flavonoids, hydrolysable tannins, condensed tannins and resins. It was observed latex cytotoxicity against the crustacean Artemia salina , which is directly proportional to the concentration of the latex (LD50 = 80.59 L / mL). We conducted a study of in vivo toxicity with repeated treatment (15 days) with latex diluted in distilled water at concentrations of 50, 100 and 150 µL /mL. Swiss female mice showed no significant changes in body mass and temperature. The hematological analysis indicated a significant raise in the percentage of granulocytes (p<0.05) in the group treated with 150 µL/mL when compared to the control. Alterations were not observed in relation to the biochemical rates (AST, creatinine and lipase). In histopathological analysisof organs, 15 days after treatment, multifocal hepatic steatosis was observed, with intensity from mild to moderate, mild in the concentration of 50 µl/L and moderate in groups of 100 and 150 µL/L. In the spleen of animal group treated with the latex with concentration of 150 µL/L we observed edema, multifocal depletion of white pulp and mild inflammatory infiltrate of polymorphonuclear cells . When the latex was added at concentrations (50-150 µL/mL) to PBMC cell cultures there was an increase in cell death of approximately 61% in all concentrations compared to cells cultured with supplemented DMEM (Article 1). Considering the use of latex diluted by the population for the treatment of vitiligo, an observational study was carried out, with collection of clinical and epidemiological data and blood samples from a population of convenience that included 10 patients with clinical diagnosis of vitiligo and 10 control patients. Out of the 20 individuals analyzed, 60% were male and 40% female, the age variable showed a normal distribution, with no significant difference in mean between groups (38.9 ± 11.0 for controls vs. 40.5 ± 11.8 with vitiligo. The onset average age of vitiligo was 20.2 ± 12.3 years. Most patients reported lesions present in the legs / feet (90%), arms / hands (80%) and head (60%), while in less than half of the patients lesions were on the genitals, armpits and chest/back. Itching was the only symptom reported by 30% of patients with vitiligo. The classification of types of vitiligo was generalized by 50%, local in 30% and universal in 20% of patients. No significant changes were observed in blood cell subpopulations of patients with vitiligo, except for the subpopulation of CD4 + T cells, which increased significantly by 17.7% compared to controls. It was also noticed an increase of CD4+/CD8+ T cells ratio in patients with vitiligo (P = 0.0076). It was also verified a significant increase of 3.6 times (P <0.0001) in the percentage CD8+ CD25+ (activated cells) of patients with vitiligo compared to controls. On the other hand, there has been a significant reduction of 1.46 fold (P = 0.0018) in percentage CD4+CD25+CD127high (activated cells) and 1.36 fold (P <0.0001) in the percentage of regulatory T cells - Treg (CD4+CD25+ CD127low). There was also a significant reduction in the percentage of CD4+CD45RA+ and CD8+ CD45RA T cells, concomitant to an increased in CD4+ CD45RO+ and CD8+CD45RO+ phenotype (P <0.001). There was a significant mean increase in HLA-DR expression in patients with vitiligo in both the CD14+ (monocytes) and CD19+ (B cells) subpopulation (P <0.01 for both) (article2). To evaluate the effect of the latex on immune cells and melanocytes, in vitro experiments were performed, where the latex was added at concentrations (50-150 uL / mL) to the cell cultures B16F10 murine melanoma. There was no significant difference in cell viability at concentrations of 50 to 100 µl/mL, however it was observed 23.19 % cell death at a concentration of 150 µl/mL. There was no significant difference in B16F10 cell melanin content latex-treated in any of the analyzed concentrations. There was a significant increase in mushroom tyrosinase activity in latex dilutions in concentrations of 100 µL / mL and 150 µL / mL, these being 43.97 and 84.76 % respectively. The use of latex may be an option in the treatment of hypopigmentation disorders such as vitiligo, however, additional studies are needed to extend the knowledge of its toxicity and mechanism of action, immunomodulation as well as isolating the constituent responsible for the activation of tyrosinase. | ||||||||||||||||||||||||
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