Corpo Discente - Egressos
Poliana Guerino Marson Ascencio
| Título | Prospecção química e atividades biológicas de Fungos Endofíticos associados à espécie vegetal Costus spiralis (Jacq) Roscoe (Costaceae). | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 10/04/2015 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Em sigilo | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | antagonismo, antioxidante, CCD, cumarinas, Costus spiralis | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | A Costus spiralis (Jacq) Roscoe (Costaceae), é uma espécie vegetal endêmica da região Amazônica e possui grande valor medicinal. Assim como todos os demais vegetais estudados, possuem em seus tecidos uma comunidade de fungos denominados endofíticos que são micro- organismos que colonizam o interior dos tecidos vegetais, de forma inter ou intracelular, sem lhes causar danos aparentes. Estes fungos são reconhecidos como valiosas fontes de substâncias bioativas. Na presente pesquisa foram isolados fungos endofíticos associados à C. spiralis coletados no Centro de pesquisa Canguçú, Pium-Tocantins. Os fragmentos de folhas e ramos de 35 espécimes foram alvos para o isolamento dos fungos. Os fragmentos foram desinfetados superficialmente, plaqueados em meio BDA e mantidos a 25 ºC ± 2. Após isolamento foram obtidos 304 isolados de fungos endofíticos, 64% obtidos de folhas, 36% de ramos, agrupados em 71 morfoespécies diferentes conforme características macroscópicas. A Taxa de Colonização foi de 77,0%, sendo que para folhas foi maior que para ramos. Ao final do processo de isolamento 281 fungos foram devidamente preservados. A atividade antagônica dos 281 isolados foi avaliada no teste de cultura pareada para substâncias difusíveis e voláteis contra os fitopatógenos alvos Monilinia fructicola, Colletotrichum gloeosporioides e Aspergillus parasiticus. Treze fungos apresentaram capacidade de inibir o crescimento dos fitopatógenos M. fructicola e/ou C. gloeosporioides. Verificou-se que o tempo de incubação dos bioensaios foi uma importante variável, sendo que a inibição foi maior após 10 dias de incubação. Dos 13 fungos que apresentaram atividade antagônica, 11 foram identificados por meio do sequenciamento das regiões ITS1 e ITS4 do gene rDNA e pertencem aos gêneros Diaporthe/Phomopsis, Cochhliobolus ou Sardoriomycetes.Estes fungos foram cultivados em BDA por 14 dias (25 ºC) e submetidos à extração hidroetanólica por maceração. Os macerados foram filtrados, rotaevaporados e liofiolizados. Todos os extratos fúngicos apresentaram atividade antioxidante pelos ensaios do sequestro do radical DPPH (1,1-difenil-2-picrilhidrazil) e pelo método poder antioxidanteredutor férrico FRAP (ferric reducing antioxidant power), sendo que as subfrações de diclorometano foram mais ativas que as frações brutas. O teste de atividade antimicrobiana dos extratos mostraram um bom espectro de ação, com valores de concentração inibitória mínima (CIM) variando entre 62,5 a 500 μg/mL. Todos os extratos demostraram ação inibitória contra as leveduras Candida albicans e C. parapsilopsis com CIM de 125 a 500 μg/mL. Oito extratos demonstraram atividade contra Bacillus subtilis (CIM entre 62,4 a 125 μg/mL), cinco frente Pseudomonas aeruginosa (CIM entre 125 a 500 μg/mL), dois contra Salmonella enterica (CIM de 125 e 62,5 μg/mL) e dois frente Enterococcus faecalis (CIM de 500 e 125 μg/mL). Na avaliação química por cromatografia em camada delgada foi observada a presença de metabólitos secundários, destacando-se cumarinas. Foi realizado quantificação de fenóis totais, e demonstrado forte correlação de Pearson positiva com a atividade antioxidante. Esse é o primeiro relato do potencial bioativo de endofíticos associados à espécie da família Costaceae presente nos ecossistemas brasileiros, sendo que os resultados obtidos nesta pesquisa demonstraram o potencial biotecnológico, seja para a obtenção de substâncias bioativas ou para emprego em métodos de controle biológico de fitopatologias. | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | Costus spiralis (Jacq) Roscoe (Costaceae) is an endemic species of the amazon region and has great medicinal value, being popularly used for relief of urinary tract infections, kidney stones, as a healing, diuretic and diabetes control. Endophytic fungi are microorganisms that colonize tissues of plants without causing apparent damage and are poorly understood, both in terms of biodiversity, as the different ecological factors involving fungus association and fungus-host-habitat. They are recognized sources of bioactive substances. In this work, endophytic fungi associated to C. spiralis, collected in Centro de Pesquisa Canguçú, PiumTocantins were isolated. The fragments of leaves and stems of 35 specimens without any apparent damage or disease were targeted for endophytic fungi isolation. The fragments were superficially disinfected and plated on PDA medium and incubated at 25 º C ± 2. After the isolation, were obtained 304 endophytic fungi isolates, 64 % from leaves and 36 % from stems. They were grouped into 71 differents morphospecies according to macroscopic characteristics. The rate of colonization (Rc) obtained fromC. spiralis was 77.0%, for leaves the rate was 83.2 % and 55.5 % to stems. From all isolates, 281 were properly preserved in the Fungal Cultures Collection on General and Appied Microbiology Laboratory on UFT.The antagonistic activity these 281 isolated fungi was tested in paired culture for diffusible and volatile substances against the pathogens Monilinia fructicola (mfa3635), Colletotrichum gloeosporioides (CG-incoper02) and Aspergillus parasiticus (IMI 24695). Thirteen fungi inhibited the phytopathogens M. fructicola and/or C. gloeosporioides growth of, and represent 4% of the total fungal isolates. Two isolates were positive for volatile tests against C. gloeosporioides(35H1) and M. fructicola (25Fa1).It was observed that the bioassay incubation time was an important variable, the greatest inhibition occurred after ten days of incubation. In all results antagonism was observed that the incubation time between the pathogen and the endophyte is important, and the inhibition was larger by 10 days of incubation. Of the 13 fungi with antagonistic activity, 11 fungi were identified by sequencing of the ITS1 and ITS4 rDNA gene and belong to the genus Diaporthe/Phomopsis, Cochhliobolus or Sardoriomycetes. These 13 fungi grown on PDA for 14 days (25 ºC) were subjected to extraction by hydroethanol maceration. The macerated were filtered and dried. The same procedure was carried with agar to obtain the negative control extract. This material was used for chemical and biological analyzes. All fungal extracts showed antioxidant activity by testing the kidnapping DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) method and by ferric reducing antioxidant power FRAP (ferric Reducing antioxidant power), and the subfractions of dichloromethane were more active than crude extratcs. In addition, all compounds showed rich chemical composition when analyzed by TLC being positive for many classes of metabolites, in particular, coumarins. The results obtained in this study demonstrated that C. spiralis and many of their endophytes have great biotechnological potential, both for obtaining bioactive substances and for employment in phytopathology control. | ||||||||||||||||||||||||
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